Ранее мы писали о микробиологическом контроле производственных чистых помещений в статье «Микробиологический мониторинг чистых помещений. Расставить все точки над І». Теперь более подробно остановимся на практических вопросах, которые возникают при выборе метода отбора проб с поверхностей и проверке его пригодности.
Контроль биозагрязнения поверхностей: методы
В соответствии с требованиями ISO 14698 и GMP, производитель должен постоянно контролировать биозагрязнения поверхностей. Данный вид анализа, согласно положениям того же ISO 14698, может проводиться двумя способами: смывов и отпечатков. На сегодня «золотым стандартом» во всем мире считается метод отпечатков (использующий контактные чашки Петри), смывы рекомендуется использовать только в случаях, когда форма поверхности не позволяет сделать отпечаток.
Метод смывов: действительно ли простой?
В Украине традиционно отдают предпочтение методу смывов, что объясняется его относительной простотой. Разберем, действительно ли это так:
- Время отбора пробы
При помощи контактной чашки проба отбирается в течение минуты – именно столько времени нужно для того, чтобы открыть чашку, прижать ее к поверхности и закрыть. В случае со смывами промежуточных стадий процесса больше, а для получения репрезентативной пробы потребуется потратить несколько минут.
- Процедура отбора
Контактная чашка максимально упрощает работу оператора: ее нужно прижать к поверхности рукой либо использовать специальный аппликатор. Для отбора смыва нужно провести свабом по всей поверхности (обычно 10 см2), совершая медленные последовательные параллельные движения, после этого – движения, перпендикулярные предыдущим.
- Необходимые материалы
Если необходимо получить отпечаток, вам понадобится контактная чашка и иногда – аппликатор, обеспечивающий воспроизводимость отборов. Смывы требуют более тщательной подготовки – нужно подготовить сваб, пробирку со средой и стерильный трафарет, а если стоит задача количественного определения микроорганизмов, к перечню добавляется смеситель, дозатор и чашки с агаром.
- Валидация и проверка пригодности метода
Чем выше степень автоматизации, тем проще унифицировать процесс и провести его валидацию. Благодаря доступности чашек промышленного производства и использованию аппликатора, прижимающего чашку с фиксированным усилием, метод отпечатков достаточно просто валидируется. В то же время метод смывов требует проведения кропотливой работы лаборатории для составления соответствующих документов и отработки методик.
- Дополнительные операции
Готовые чашки с нужной питательной средой на сегодняшний день широко известны, даже самостоятельное приготовление контактных чашек при наличии сноровки – также достаточно простой процесс. Для того, чтобы брать смывы с поверхности, кроме приготовления пробирок нужно уделить время на подготовку питательной среды для количественного определения.
- Оборудование и материалы
Коммерчески доступные контактные чашки поставляются в тройной упаковке, стерилизованной гамма-излучением (для работы в зонах А и B), в одинарной – для зон D.
Для смывов понадобятся свабы и трафареты промышленного производства (стерильные) либо самостоятельно подготовленные пробирки, среды, трафареты и т.д.
Безусловно, метод смывов незаменим при исследовании микробиологической чистоты технологического оборудования сложной конфигурации. Если же объектом исследования является поверхность – выбор в пользу контактных чашек очевиден: скорость отбора проб и отсутствие дополнительных операций значительно уменьшает вероятность ошибки оператора и повышает воспроизводимость метода.
Проверка пригодности метода
Микробиологическая чистота производственных помещений обеспечивается использованием моющих и дезинфицирующих средств, и здесь начинаются сложности с валидацией, независимо от того, какому методу Вы отдаете предпочтение. Даже тщательное смывание не гарантирует полного удаления дезинфектантов с поверхностей, что может привести к получению ложноотрицательных результатов: остатки очищающих средств собираются чашкой или тампоном вместе с потенциальными загрязнениями и угнетают рост микроорганизмов.
Таким образом, использование дезинфицирующих средств создает для контролирующей лаборатории нетривиальную задачу: с одной стороны, доказать эффективность применяемого дезинфицирующего средства, с другой – разработать процедуру нейтрализации действия его остаточных количеств.
Как поступить?
ГФУ в п. 2.6.12 (таблица «Нейтрализующие агенты») приводит перечень нейтрализаторов вместе с активными веществами дезифектантов. То есть при приготовлении питательных сред или промывных жидкостей лаборатория должна подобрать состав нейтрализаторов таким образом, чтобы обезвредить остатки на поверхностях производственного оборудования и мебели. Производители готовых питательных сред учитывают эти рекомендации, разрабатывая рецептуры своих продуктов. Например, компания Pharmamedia Dr.Muller (далее PMM) разработала среду TSA + LTHT, способную нейтрализовать остатки самых популярных дезинфектантов (спирты, уксусная кислота, гипохлорит натрия, перекись водорода либо формальдегид).
Поиски эффективного, нетоксичного и менее коррозионного дезинфицирующего агента привели к созданию и последующему использованию аммониевых соединений (ЧАС) и бигуанидов (например, Аниосурф, Виндез), остатки которых сложнее обезвредить. Стандартная среда TSA-LTHT может нейтрализовать не более 15 мкг ЧАС/л; к сожалению, увеличение концентрации нейтрализатора не дает желаемого результата, а только угнетает рост тест-штаммов.
С 2005 года ведущие производители питательных сред ведут разработки подходящей рецептуры, пригодной для эффективной нейтрализации ЧАС и бигуанидов, но на сегодняшний день такие продукты имеют ряд недостатков: короткий срок хранения, образование осадка, неудовлетворительные коэффициенты восстановления некоторых грамм-отрицательных микроорганизмов или мутность среды. История успеха – разработка компании РММ – контактные чашки со средой TSA-U+. Этот продукт пригоден для инактивации даже значительных количеств ЧАС и бигуанидов, не обладая вышеперечисленными недостатками. С подробной информацией о процессе разработки, испытаниях и списком использованных штаммов Вы можете ознакомиться по ссылке. Во время тестирования был реализован экстремальный сценарий: непосредственно на чашку наносили максимальное теоретически возможное количество дезинфицирующего средства, после чего вносили тест-штамм.
Конечно же, каждая лаборатория самостоятельно выбирает стратегию – разрабатывать собственную пропись нейтрализаторов и доказывать их способность инактивировать остатки дезсредства либо сэкономить время своих сотрудников, отдав предпочтение готовому решению, и быть уверенным в эффективности работы.
Компания «ХИМЛАБОРРЕАКТИВ» заботится о своих клиентах, поэтому мы собрали самые популярные среды для мониторинга гигиены на фармацевтических производствах в брошюре. Если у Вас возникли вопросы относительно выбора подходящей среды или Вам интересно протестировать продукцию РММ в работе, сообщите, и наши специалисты предоставят все необходимое.